哮喘联盟

   摘要
   本实验研究胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）在哮喘患者气道重构中的作用及其调节机制。收集哮喘患者和健康对照者的支气管活检标本，采用特异性抗体染色，检测TSLP、α-SMA 和I型胶原表达。为研究TSLP的调节通路，通过shRNA和基因转染，分别对人肺成纤维细胞（HLF-1）进行TSLP基因沉默和过表达，采用ELISA和western blot检测TSLP受体（TSLPR）的表达水平。TSLP信号通路中，采用Western blot检测总的STAT3、STAT5和磷酸化STAT3（pSTAT3）、STAT5（pSTAT5）、TSLP、α-SMA和I型胶原蛋白表达。α-SMA和I型胶原的mRNA表达采用实时逆转录检测。为进一步在HLF-1确认TSLP-STAT3信号通路，采用靶向小分子抑制STAT3活性，而后检测TSLP 诱导的α-SMA 和I型胶原蛋白和mRNA表达。首先，哮喘患者气道上皮细胞的TSLP、α-SMA和I型胶原存在过表达。第二，STAT3活性和α-SMA与I型胶原的表达受TSLP的调控。特别是，HLF-1细胞引入TSLP后能诱导pSTAT3、α-SMA和I型胶原表达，而沉默TSLP后，α-SMA和I型胶原表达受到抑制。第三，给予STAT3抑制剂后，pSTAT5无显著变化；TSLP诱导的α-SMA和I型胶原表达依赖于STAT3。采用靶向小分子抑制STAT3活性后，未能检测到TSLP诱导的α-SMA和I型胶原表达。TSLP在哮喘患者气道重构中的作用是通过STAT3信号通路实现的。

                                                              （林江涛 审校）
              Cell Biochem Funct. 2012 Nov 27. doi: 10.1002/cbf.2926. [Epub ahead of print]

Thymic stromal lymphopoietin promotes asthmatic airway remodelling in human lung fibroblast cells through STAT3 signalling pathway. 

Wu J, Liu F, Zhao J, Wei Y, Lv J, Dong F, Bi W, Wang X, Wang J, Liu W, Dong L, Tian H.

Source
Department of Pulmonary Medicine, Qilu Hospital of Shandong University, Jinan, Shandong, China.

Abstract  
This study aimed to identify the role and regulation of thymic stromal lymphopoietin (TSLP) in asthmatic airway remodelling. To identify the expression of TSLP, α smooth muscle actin (α-SMA) and collagen I in bronchial tissues, bronchial biopsy specimens were collected from patients with asthma and healthy controls and stained with specific antibodies, respectively. To characterize the signalling pathways regulated by TSLP, we silenced or overexpressed TSLP in human lung fibroblast (HLF-1) cells by shRNA approaches or transfection and detected the expression of TSLP receptor (TSLPR) by enzyme-linked immunosorbent assay and Western blot analysis. In TSLP signalling pathway, the protein expression of total signal transducer and activator of transcription 3 (STAT3), STAT5, the phosphorylation of STAT3 (pSTAT3) and STAT5 (pSTAT5), TSLP, α-SMA and collagen I were also detected by Western blotting. In addition, the α-SMA, collagen I and mRNA expression were determined by real-time reverse-transcription. To further confirm the TSLP-STAT3 signalling pathway in HLF-1 cells, we inhibited STAT3 activity by targeted small molecules and then detected TSLP-induced expression of α-SMA and collagen I in both mRNA and protein levels by quantitative real-time reverse-transcription and Western blotting, respectively. First, overexpression of TSLP, α-SMA and collagen I was detected in epithelium collected from patients with asthma. Second, STAT3 activity and the expression of α-SMA and collagen I were controlled, regulated by TSLP. Specifically, the pSTAT3, α-SMA and collagen I were induced by the introduction of TSLP in HLF-1 cells, and the repression of α-SMA and collagen I was detected after TSLP silencing. Third, no changes of pSTAT5 were found in the presence of the STAT3 inhibitor, and TSLP-induced α-SMA and collagen I upregulation is in a STAT3 dependent manner. If we inhibit STAT3 activity by STAT3 targeted small molecules, TSLP-induced α-SMA and collagen I upregulation cannot be detected. The functions of TSLP in asthmatic airway remodelling were performed through STAT3 signalling pathway. 

Cell Biochem Funct. 2012 Nov 27. doi: 10.1002/cbf.2926. [Epub ahead of print]