动物实验求帮忙!

toledo

无做哮喘小鼠支气管肺泡灌洗，请教具体方法？以及BALF细胞计及EOS分类计数的操作方法？

cerci

曾经做过肺泡灌洗，不过是用豚鼠做的，因为豚鼠致敏容易而且气管大些，容易灌洗
一般都是颈动脉放血或心脏取血处死动物，然后用生理盐水或HANK'S液5ml×3次灌洗
细胞计数及分类 全部BAL液2000转10min,4度离心,收集沉淀的细胞,重悬于Hank.s液中，进行Eos绝对计数。取数滴BAL液至玻片上,行细胞分类。

lionel

重庆医科大学学报2005年第4期有一篇文章《一种改良型小鼠哮喘模型方法的建立及评价》，我现在找不到全文，你可以想办法找全文参考一下 目的:改良建立小鼠哮喘模型的方法并评价其效果。方法:清洁级BALB/c小鼠20只,随机分为模型组和对照组,模型组于第0和14d注射OVA(卵清蛋白)致敏,第21~25天雾化吸入5%OVA激发,对照组用生理盐水替代。结果:模型组在激发过程中出现明显头面部瘙痒,呼吸加深加快,安静少动,弓背,前肢缩抬等哮喘急性发作表现。BALF(支气管肺泡灌洗液)中白细胞总数及嗜酸性粒细胞分类明显增多。血清及BALF中IL-4明显增高,INF-γ下降,OVA特异性IgE增高。肺组织病理切片见小支气管及伴行血管周围有较多炎症细胞浸润,可见大量嗜酸性粒细胞,杯状细胞增生,平滑肌增厚,部分肺泡间隔融合形成肺气肿。结论:通过对小鼠哮喘模型建立方法的改良,成功复制出小鼠哮喘发作的动物模型。

vvvvvv

实验动物与比较医学, 2005年 03期《小鼠哮喘模型的建立及其相关机理初步研究》目的通过制备BALB／c小鼠过敏性哮喘模型,研究共刺激分子OX40在哮喘中的表达。方法腹腔注射卵蛋白致敏小鼠,两周后雾化吸入卵蛋白激发哮喘发作,以生理盐水腹腔注射及雾化吸入为空白对照。比较支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及嗜酸性粒细胞和淋巴细胞数百分数;肺组织HE及PAS染色以确定动物造模是否能模拟哮喘的病理状态;肺组织冰冻切片行免疫组化检测哮喘小鼠肺组织OX40的表达情况。结果卵蛋白激发后,小鼠的支气管肺泡灌洗液中的细胞总数及嗜酸性粒细胞和淋巴细胞百分数较对照组增高,且差异有统计学意义,哮喘小鼠肺组织中OX40的表达明显增多。结论 BALB／c小鼠是制备过敏性哮喘的理想模型,哮喘时小鼠肺组织中OX40的表达明显增多。

Doctor

1.麻醉小鼠之后，用10ml针管经肝脏至下腔静脉尽量抽净小鼠体内的血液使之因失血死亡并减少肺各血管的血液充盈量，若抽血较少眼科剪剪裂下腔静脉放血（血液留至腹腔，尽量使胸腔视野清晰）。
2.肺泡灌洗时用HANK'S液2ml×3次（其中每次灌洗时反复抽吸3次，回收铝可达80％以上），切记速度勿快，尽量力道一致，可以完全打开胸腔，去掉心脏直视下观察抽吸状况。
3.BALK10000转×5min,弃上清，沉渣用定量HANK'S液稀释之后，取20微升稀释液细胞计数板进行计数。